枸杞（Fructus lycii）是一種可食用的茄科植物，其干制品枸杞子在本草綱目和其它書籍中均有大量記載。王嬌嬌等[1]對發(fā)表在國內(nèi)期刊上的文獻(xiàn)進(jìn)行統(tǒng)計分析，發(fā)現(xiàn)單味枸杞子的使用比例占到了61.1%。對于枸杞子，不同時期的中藥學(xué)家都有不同的認(rèn)識，但其明目、抗氧化效果被歷代醫(yī)學(xué)工作者所承認(rèn)[2-4]?，F(xiàn)如今，隨著現(xiàn)代社會的高速發(fā)展，對枸杞子明目功效的研究被科學(xué)家們愈加重視?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)工作者研究發(fā)現(xiàn)，枸杞子中包含枸杞多糖（Lycium barbarum polysaccharide，LBP）、葉黃素、氨基酸、無機(jī)鹽等，對這些成分進(jìn)行深入研究發(fā)現(xiàn)[5-7]，這些物質(zhì)都具有抗氧化能力。在此基礎(chǔ)上，枸杞多糖被發(fā)現(xiàn)具有緩解視疲勞、抗衰老和保護(hù)DNA的作用[8-9]。馬小飛[10]研究發(fā)現(xiàn)，枸杞多糖可以代償性激活體內(nèi)部分細(xì)胞中Nrf-2抗氧化通路，從而進(jìn)一步增強(qiáng)細(xì)胞的抗氧化能力，對眼組織起到保護(hù)作用，這些都為枸杞子在緩解視疲勞的研究提供了理論依據(jù)。

晶狀體是眼球中重要的屈光間質(zhì)，對光線有屈光效果，具有過濾紫外線，保護(hù)視網(wǎng)膜的作用。晶狀體后面和玻璃體接觸，光線通過晶狀體后，通過玻璃體而到達(dá)視網(wǎng)膜，最終將捕獲的光信號傳至大腦。嚴(yán)宏等[11]研究發(fā)現(xiàn)，晶狀體與視疲勞之間具有密切的關(guān)系。晶狀體內(nèi)沒有血管，它所需的營養(yǎng)來自房水。當(dāng)房水的代謝或晶狀體囊出現(xiàn)問題時，原本透明的晶狀體會變得不透明，最終影響視力，引起視疲勞及其它眼科疾病。現(xiàn)在緩解視疲勞的方法很多，但效果都不是十分理想。

陳艷麗等[12]研究顯示過強(qiáng)的光照會引起視力的損傷，經(jīng)常伴隨色素紊亂，并引起晶狀體渾濁及皮膚光老化現(xiàn)象。桑傳蘭等[13]研究發(fā)現(xiàn)，過強(qiáng)的光照會使肝臟功能受損，其機(jī)制可能是因為過強(qiáng)的光照促使體內(nèi)產(chǎn)生過量的活性氧自由基，引起蛋白質(zhì)和脂質(zhì)過氧化[14-16]，導(dǎo)致體內(nèi)肝細(xì)胞受損。為了探究枸杞子對視疲勞的緩解作用，本文擬采用枸杞子提取物為原料，以C57BL/6J小鼠為實驗動物，通過檢測晶狀體與肝臟抗氧化指標(biāo)來評價枸杞子對視疲勞的緩解作用。

1 材料和方法

1.1 材料、試劑與儀器

基礎(chǔ)飼料、實驗小鼠：斯貝福（北京）生物技術(shù)有限公司；丙二醛（malonaldehyde，MDA）試劑盒、總超氧化物歧化酶（superoxide dismutase activity，SOD）試劑盒、過氧化氫酶（catalase activity，CAT）試劑盒、谷胱甘肽過氧化物酶（glutathione peroxidase activity，GSH-Px）試劑盒、總抗氧化能力 （total antioxidant capacity，TAOC）試劑盒、三氯乙醛（純度>99%）：上海麥克林生化科技有限公司；復(fù)方托吡卡胺滴眼液：參天制藥（中國）有限公司；氧氟沙星眼膏：沈陽興齊眼藥股份有限公司。

LS120d-Ⅱ型LED燈：深圳市愛圖仕影像器材有限公司；U-3900型紫外分光光度計：日本HITACHI公司。

1.2 枸杞子提取物來源

稱取枸杞子（符合2015版《中華人民共和國藥典》標(biāo)準(zhǔn)）藥材，每次提取水量為藥材體積6倍，提取3次，合并提取液，提取液濃縮得到水提物浸膏，加入適量乙醇，進(jìn)行醇沉，收集沉淀物，干燥醇沉沉淀物制得枸杞子提取物（每克枸杞子提取物相當(dāng)于枸杞子生藥3.5 g）。

1.3 實驗動物的選擇

健康雄性 C57BL/6J小鼠，6 周齡，（18±1）g，許可證號為SCXK（京）2016-0002，飼養(yǎng)于實驗動物中心[（23±2）℃，相對濕度55%～75%]。老鼠置于白色塑料籠中，每籠4只，每組3籠。動物房從早上7點(diǎn)至晚上7點(diǎn)給予正常光照，其余時間無光照，并且為動物提供充足的食物和水。

1.4 光損傷模型制備及動物分組

強(qiáng)光照射在暗室內(nèi)密閉進(jìn)行，無自然光干擾。每只小鼠被單獨(dú)的放置在由亞克力透明板制成的小方格中，每個格子的長、寬、高分別為 10、10、8 cm，并在光照前對小鼠眼球進(jìn)行涂抹眼藥處理，避免眼球表面由于長時間光照引起脫水。將光照器懸掛于小鼠頂端50 cm處，采用垂直照射方式照射，并在與小鼠同一高度處懸掛溫度計，進(jìn)行溫度實時監(jiān)控，排除溫度升高引起小鼠眼球光熱損傷的可能。根據(jù)前期預(yù)實驗結(jié)果，實驗組小鼠在（9 000±500）Lux光強(qiáng)下，每天照射4 h，連續(xù)照射7 d，光照期間正常進(jìn)食與飲水。設(shè)立5個實驗分組，每組12只，期間采用灌胃方式分別對5組實驗動物給藥，其中正常對照組和光損傷模型組每天灌胃等量的溶媒；枸杞子提取物低、中和高劑量組每天的給藥劑量分別為280、370、460 mg/kg。連續(xù)給藥8周后進(jìn)行相關(guān)的抗氧化指標(biāo)檢測。

正常組、模型組分別用NOR、MOD表示，枸杞子低劑量組、枸杞子中劑量組、枸杞子高劑量組分別用GQL、GQM、GQH 表示。

1.5 體重及攝食量記錄

體重及攝食量自給藥開始后進(jìn)行記錄，其體重每周稱量一次，共計8周，攝食量每天測量一次并記錄。

1.6 晶狀體中相關(guān)抗氧化能力的檢測

小鼠在脫頸處死后立即摘取眼球，在高倍顯微鏡下，將晶狀體從眼球中剝離出來，剝離過程在冰盤上進(jìn)行。加入勻漿介質(zhì)用勻漿器勻漿，4℃環(huán)境離心10min（12000r/min），收取上清液，供待檢測指標(biāo)（GSHPx、T-AOC）使用。各項步驟按試劑盒操作說明書上步驟進(jìn)行。

1.7 肝組織中相關(guān)抗氧化能力指標(biāo)檢測

參照劉佳維等的研究方法[17]，將小鼠體內(nèi)取出的肝組織立即放入-80℃冰箱中保存，供待檢測生化指標(biāo)（SOD、MDA、CAT、GSH-Px）使用。制備肝組織勻漿時，取出于低溫保存的肝組織，按料液比1∶9（g/mL）加冰生理鹽水，在低溫環(huán)境下用研磨棒將離心管中的肝組織研磨成組織勻漿。4℃、3 000 r/min低溫高速離心機(jī)離心10min，取上清液備用。各項指標(biāo)根據(jù)試劑盒說明檢測。

1.8 統(tǒng)計學(xué)分析

統(tǒng)計方法采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，結(jié)果以±SD表示，P＜0.05表示具有統(tǒng)計學(xué)差異。

2 結(jié)果分析

2.1 體重與攝食量

各組小鼠體重自開始給藥時進(jìn)行記錄。體重與攝食量見圖1～圖3。

圖1 起始體重記錄
Fig.1 Starting weight record

字母相同表示組間無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。

由圖 1可知，其 NOR、MOD、GQL、GQM 和 GQH組初始體重分別為 （21.22±2.33）、（20.36±2.14）、（22.13 ±3.21）、（21.55 ±3.11）、（20.33 ±2.54） g，GQL、GQM、GQH組與MOD組比較沒有統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。由圖2各組小鼠的最終體重上看，GQL、GQM、GQH組較MOD組體重沒有統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05），其最終體重分別為（31.25±3.58）、（30.28±2.14）、（31.66±3.21）、（30.25±3.11）、（32.14±3.51）g。從圖 3 攝食量上看，枸杞子提取物干預(yù)組較模型組攝食量沒有統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05），NOR、MOD、GQL、GQM 和 GQH 組平均攝食量分別為（4.22±0.56）、（4.41±0.42）、（4.33±0.32）、（4.28±0.36）、（4.48±0.24）g。

2.2 晶狀體抗氧化結(jié)果分析

采用酶法對各組小鼠晶狀體的GSH-Px和TAOC活力進(jìn)行測定，各組測定結(jié)果見表1。

如表1所示，分析小鼠在（9 000±500）Lux的光強(qiáng)下，不同劑量的枸杞子提取物對小鼠晶狀體內(nèi)抗氧化能力的影響。從GSH-Px和T-AOC兩個抗氧化指標(biāo)上看，藥物干預(yù)組抗氧化值高于模型組，并且其活力隨著枸杞子提取物劑量的升高而升高。與模型組比較，枸杞子提取物低、中和高劑量組均顯著升高 （P＜0.05）。從表中結(jié)果可以看出，低、中、高劑量的枸杞子提取物均對光損傷小鼠晶狀體具有不同程度的抗氧化能力，并且枸杞子提取物的劑量越高，其表現(xiàn)的抗氧化效果越好。

圖2 最終體重記錄
Fig.2 Final weight record

字母相同表示組間無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。

圖3 小鼠日均攝入量
Fig.3 Mean daily intake of mice

字母相同表示組間無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。

表1 各組晶狀體抗氧化指標(biāo)
Table 1 Antioxidant index of lens in each group U/mg

注：上標(biāo)字母相同表示組間無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）；字母不同表示組間有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05）。

2.3 枸杞子提取物對光損傷小鼠肝組織中MDA含量的影響

各組小鼠肝組織MDA含量測定結(jié)果見圖4。

圖4 枸杞子提取物對光損傷小鼠肝組織MDA含量的影響
Fig.4 Effects of the extract on MDA content in liver tissue of light-damaged mice

字母相同表示組間無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）；字母不同表示組間存在統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05）。

過量的光照會引起小鼠體內(nèi)產(chǎn)生大量的自由基，其中包括丙二醛、羥基、羰基以及新的自由基等，能攻擊生物膜中的多不飽和脂肪酸。另一方面，這些物質(zhì)的過度產(chǎn)生導(dǎo)致體內(nèi)自身的抗氧化平衡體系失衡，并且對體內(nèi)細(xì)胞DNA的合成、裂解及轉(zhuǎn)錄造成損傷，從而破壞生物膜結(jié)構(gòu)，使體內(nèi)的脂類受到不可逆損傷[18-19]。從圖4結(jié)果上看，NOR和MOD組的MDA含量分別為（1.22±0.16）nmol/mg 和（3.55±0.36）nmol/mg，說明過強(qiáng)的光照能導(dǎo)致小鼠肝臟組織中MDA含量顯著增加，而攝入低、中、高劑量的枸杞子提取物后，與模型組相比，MDA含量分別下降14.6%、17.2%和20.8%，其中，與模型組相比較，枸杞子提取物低、中、高劑量組具有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05）。

2.4 枸杞子提取物對小鼠肝組織中SOD活力的影響

各組小鼠肝組織SOD活力測定結(jié)果見圖5。

圖5 受試物對光損傷小鼠肝組織SOD活力的影響
Fig.5 Effects of the extract on SOD activity in liver tissue of lightdamaged mice

字母相同表示組間無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）；字母不同表示組間存在統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05）。

SOD是一種廣泛存在于動植物、微生物中的金屬酶，能催化生物體內(nèi)的超氧自由基發(fā)生歧化反應(yīng)，從而清除O2-自由基，減緩氧化應(yīng)激引起的氧化損傷[20]。實驗結(jié)果顯示，過強(qiáng)的光照導(dǎo)致肝組織中SOD酶活力明顯降低，SOD活力由正常組的（35.7±4.88）U/mg降至模型組的（19.33±4.42）U/mg（P＜0.05），而枸杞子提取物低、中和高劑量組小鼠肝組織中的SOD活力明顯上升，分別提高31.5%、39.1%和44.7%。其中，與模型組比較，枸杞子提取物低、中和高劑量組均具有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05）。

2.5 枸杞子提取物對小鼠肝組織中CAT活力的影響

各組小鼠肝組織CAT活力測定結(jié)果見圖6。

圖6 受試物對光損傷小鼠肝組織CAT活力的影響
Fig.6 Effects of the extract on CAT activity of liver tissue in lightdamaged mice

字母相同表示組間無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）；字母不同表示組間存在統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05）。

CAT是一種過氧化氫酶，能夠有效清除體內(nèi)的過氧化氫，減緩氧化應(yīng)激引起的氧化損傷[21]。由圖6可知，過強(qiáng)的光照引起肝組織中CAT酶活力明顯降低（P＜0.05），CAT活力由正常組的（72.33±7.58）U/mg降為模型組的（22.35±2.14）U/mg。給予低、中和高劑量的枸杞子提取物連續(xù)干預(yù)8周后，小鼠肝組織中的CAT活力與模型組相比明顯上升，分別提高46.6%、53.4%和66.5%。與模型組相比，枸杞子提取物低、中和高劑量組均有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05）。

2.6 枸杞子提取物對肝組織中GSH-Px活力的影響

各組小鼠肝組織GSH-Px活力測定結(jié)果見圖7。

圖7 枸杞子提取物對光損傷小鼠肝組織GSH-Px活力的影響
Fig.7 Effects of the extract on GSH-Px activity in liver tissue of light-damaged mice

字母相同表示組間無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）；字母不同表示組間存在統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05）。

GSH-Px是機(jī)體內(nèi)廣泛存在的一種重要的催化過氧化氫分解的酶，能夠有效清除體內(nèi)的過氧化氫。它特異的催化還原型谷胱甘肽對過氧化氫的還原反應(yīng)，減緩氧化應(yīng)激引起的氧化損傷[22]。圖7結(jié)果顯示，光損傷之后導(dǎo)致肝組織中GSH-Px酶活力明顯降低，酶活力由正常組的（1 946.00±159.6）U/mg下降至（1 486±168.9）U/mg（模型組）。給予低、中和高劑量的枸杞子提取物連續(xù)干預(yù)8周后，肝組織中的GSH-Px酶活力較模型組明顯上升，分別提高11.6%、15.2%和18.7%。與模型組相比，枸杞子低、中和高劑量組均具有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05）。

3 結(jié)論

本研究中使用的枸杞子提取物經(jīng)測定含有枸杞多糖。光損傷動物實驗評價發(fā)現(xiàn)，280 mg/kg劑量的枸杞子提取物能夠明顯減輕 （9 000±500）Lux光強(qiáng)引起的氧化應(yīng)激損傷，對小鼠的視力具有一定的改善作用。通過對小鼠晶狀體中抗氧化能力的測定發(fā)現(xiàn)，低、中和高劑量的枸杞子提取物可以明顯提高GSH-Px和T-AOC活力，其抗氧化效果在干預(yù)的劑量范圍內(nèi)隨著枸杞子提取物劑量的提高而升高。通過測定肝臟的抗氧化指標(biāo)發(fā)現(xiàn)，枸杞子提取物可以明顯降低肝臟MDA含量，升高SOD、CAT和GSH-Px酶活力，且低劑量即可起效，并呈現(xiàn)出劑量依賴性。這說明枸杞子提取物的抗氧化能力不僅體現(xiàn)在晶狀體中，還可能體現(xiàn)在其它眼組織中，說明枸杞子提取物在體內(nèi)具有抗氧化能力。由于晶狀體的生理狀態(tài)與視疲勞有密不可分的關(guān)系，說明枸杞子提取物具有緩解視疲勞的功效。